穩定轉染細胞株構建實(shí)驗

穩定轉染細胞株構建實(shí)驗

  穩定表達細胞株（穩轉細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長(cháng)期穩定表達該基因。

 在基因功能的研究中，基因是否有效轉染靶細胞，是功能研究的前提條件之一。而穩定表達細胞株則彌補了瞬時(shí)感染（或轉染）一些功能實(shí)驗中由于外源基因表達時(shí)間短的缺陷，便于長(cháng)期觀(guān)察基因對于細胞功能的影響以及蛋白間相互作用。

用轉染質(zhì)?；虿《厩秩镜姆椒▽嫿ê玫暮谢虻妮d體導入細胞，根據不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的藥物進(jìn)行篩選混合陽(yáng)性克隆。在陽(yáng)性混合克隆的基礎上，得到單細胞長(cháng)出的陽(yáng)性單克隆，繼而得到穩定轉染細胞株。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。

上海生物有著(zhù)多年構建穩轉細胞株的經(jīng)驗，已在H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多個(gè)種屬細胞中成功構建過(guò)表達和RNAi穩轉細胞株。
   產(chǎn)品特點(diǎn)：
   1、穩定：15代以?xún)确€定轉染細胞穩定表達。
   2、迅速：一般控制在1個(gè)月以?xún)韧瓿蓸嫿ā?br/>    3、經(jīng)濟：價(jià)格實(shí)惠，性?xún)r(jià)比高。
   4、質(zhì)量：對外源基因進(jìn)行嚴格鑒定。

穩定轉染細胞株構建實(shí)驗的兩種方法
   1、轉染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩定細胞系。對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過(guò)表達，如果轉染效率達到40%，基因過(guò)表達尚可。但是對于基因干擾實(shí)驗，對轉染效率要求遠遠高于基因過(guò)表達，通常質(zhì)粒轉染無(wú)法滿(mǎn)足。另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無(wú)法滿(mǎn)足較長(cháng)時(shí)間的檢測項目；質(zhì)粒轉染整合幾率極低，穩定細胞株構建耗時(shí)耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。

   2、病毒感染篩選穩定細胞株
  病毒感染方法較質(zhì)粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株，由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩定細胞株的理想載體。

  穩定表達細胞株構建服務(wù)流程
   1、載體構建：將外源基因構建到合適的載體上，如需病毒轉染，則包裝病毒。
   2、篩選濃度測定：以 10-14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
   3、細胞接種：轉染實(shí)驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長(cháng)率和細胞形狀而定。進(jìn)行轉染當天細胞應達到 60%-80% 覆蓋。
   4、細胞轉染：用構建好的載體（或包裝好的病毒）轉染目的細胞。
   5、抗生素篩選。
   6、鑒定篩選結果。

   客戶(hù)需要提供
   1、構建好的外源基因載體或基因模板。
   2、待轉染的細胞系（ 1×106 個(gè)細胞，可傳代，倍增時(shí)間小于 48 小時(shí)），特殊細胞需提供培養基。
 
我們提供
   1、構建好的外源基因載體。
   2、構建好的穩定細胞系。
   3、構建穩轉細胞株實(shí)驗報告及相關(guān)的外源基因表達分析。

目前，上海申知心生物科技有限公司，主營(yíng)實(shí)驗技術(shù)服務(wù)、服務(wù)、動(dòng)物模型構建、細胞株、elisa試劑盒等，歡迎廣大科研愛(ài)好者前來(lái)咨詢(xún)選購！